"Ba Nữ Thám Tử - Totally Spies" kể về cuộc sống và những cuộc phiêu lưu của ba cô gái trẻ: Sam, Clover và Alex, những nữ điệp viên siêu hạng. Mặc dù mỗi người có tính cách khác nhau, nhưng họ luôn phối hợp nhịp nhàng trong các nhiệm vụ bí ẩn được giao bởi ông Jerry, lãnh đạo của tổ chức WOOHP - Tổ chức Quốc tế về Bảo vệ Con người. Thực chất, Jerry là một người nghiêm khắc nhưng lại rất sợ mẹ mình, nên ông đã nói dối mẹ rằng mình là chủ một khách sạn thay vì tiết lộ công việc thực sự. Mẹ của ba cô gái biết các con mình là điệp viên và đã mua cho chúng một ngôi nhà gần trường học. Bên cạnh những nhiệm vụ nguy hiểm, họ vẫn sống cuộc sống bình thường của tuổi teen, đi học và hẹn hò như bao cô gái khác.
