"Ba Nữ Thám Tử - Totally Spies" kể về cuộc sống của ba cô gái Sam, Clover và Alex, những nữ điệp viên siêu hạng tuổi thiếu niên. Mỗi người có tính cách riêng nhưng họ phối hợp rất ăn ý trong các nhiệm vụ chống lại những tên tội phạm quốc tế nguy hiểm. Nhờ vào ông Jerry, lãnh đạo của WOOHP - một tổ chức bảo vệ con người, họ nhận được các nhiệm vụ bí mật. Jerry là một người nghiêm khắc nhưng luôn lo lắng về mẹ mình, nên đã giấu bà về công việc thực sự. Dù là điệp viên, ba cô gái vẫn sống cuộc sống bình thường với những hoạt động như đi học và có bạn trai. Mẹ của họ biết con mình là điệp viên và đã mua cho họ một ngôi nhà lớn gần trường để thuận tiện cho cuộc sống hàng ngày.
