"Ba Nữ Thám Tử - Totally Spies" là câu chuyện về ba cô gái tuổi teen tài năng: Sam, Clover và Alex, những điệp viên siêu hạng làm việc cho WOOHP - Tổ chức Quốc tế về Bảo vệ Con người. Mặc dù có tính cách khác nhau, họ luôn phối hợp ăn ý trong các nhiệm vụ truy bắt tội phạm quốc tế nguy hiểm. Lãnh đạo của họ, ông Jerry, là một người nghiêm khắc nhưng lại sợ mẹ mình, nên ông đã nói dối bà rằng mình chỉ là một ông chủ khách sạn. Mẹ của ba cô gái cũng biết về công việc của con và đã tặng cho họ một ngôi nhà gần trường học. Cùng với những cuộc phiêu lưu điệp viên, Sam, Clover và Alex cũng sống cuộc sống bình thường của các cô gái tuổi vị thành niên, đi học và có bạn trai như bao bạn bè khác.
